下面筆者談下藥廠設計之植物細胞培養生產天然藥物的方法。植物細胞培養是生產天然藥物的一種重要方法,這些藥物大多是植物細胞的次級代謝物,植物細胞培養生產次級代謝物的基本過程如下。
1、外植體的選擇與處理
外植體是指從植株中取出,經過預處理后,用于植物組織、細胞培養的植物組織(包括根、莖、葉、芽、花、果實、種子等)的片斷或小塊。一般的處理方法是:將其切成0.5~1cm的片斷或小塊,用70%~75%的乙醇溶液或者5%的次氯酸鈉、10%的漂白粉、0.1%的升汞溶液等進行消毒處理,再用無菌水充分漂洗,以除去殘留的消毒劑。
2、植物細胞的獲得
從外植體獲得植物細胞的方法主要有三種,即外植體直接分離法、愈傷組織分離法和原生質體再生法。
3、植物細胞擴大培養
將上述方法獲得的植物細胞在生長培養基中擴大培養,以獲得足夠數量的優質細胞。如果獲得的細胞不夠理想,還可以通過篩選、誘變、原生質體融合或基因重組等方法進行細胞改良,再進行細胞擴大培養。
4、植物細胞懸浮培養或固定化培養
獲得足夠量植物細胞以后,就可以進行細胞懸浮培養。植物細胞懸浮培養是指植物細胞(主要是小細胞團)懸浮于液體培養基中,在人工控制的生物反應器中生長、繁殖和新陳代謝的過程。在生物反應器中進行大規模植物細胞懸浮培養的方式主要有分批培養、半連續培養、連續培養和兩相培養等。也可進行固定化培養,即與固定化酶或固定化微生物細胞類似將植物細胞固定(或包埋)于海藻酸鹽和卡拉膠等載體中。
5、目標次級代謝物的分離純化
細胞培養完成后,如果目標次級代謝產物存在于細胞外,則可直接根據次級代謝物的分布情況,分別收集細胞或者培養液,在兩相培養中則收集所使用的有機溶劑或者高分子聚合物等,再采用各種純化分離技術進行分離、純化,得到所需的各種次級代謝產物。如果次級代謝物存在于細胞內,則要經過細胞破碎,然后再進行提取和分離純化。植物細胞次級代謝物的分離純化方法,常用的有沉淀分離、膜分離和結晶等。